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百蕊草口服液中紫云英苷及總黃酮的含量測定

來源:萬方期刊網  時間:2018/11/13 3:00:01  點擊:797

  【摘要】目的:建立百蕊草口服液中紫云英苷和總黃酮的含量測定方法。方法:采用RP-HPLC測定,C18柱,流動相為乙腈-水(23:77),用冰醋酸調pH至3.85,流速1.0mL·min-1,檢測波長346nm;供試品溶液的制備采用50%乙醇提取一次,并以蘆丁作為對照品,用甲醇提取,用Alcl3顯色,采用紫外分光光度法測定百蕊草口服液中總黃酮的含量。結果:測定了同一產地不同批次的百蕊草口服液,紫云英苷含量在1.514mg-1.637mg;總黃酮的含量在6.945mg-8.760mg之間。結論:建立的測定方法正確、簡便。

  【關鍵詞】百蕊草口服液;紫云英苷;RP-HPLC;總黃酮;蘆??;含量測定
  【中圖分類號】R284.1【文獻標識碼】A文章編號:1004-7484(2012)-05-1030-021.儀器與試藥
  LC-10Atvp/SPD-10Avp型高效液相色譜儀;高壓恒流泵;FLUORESCENCE HPLC MONITOR(發射熒光監視器);N2000色譜工作站;UV-2550紫外可見分光光度計;超聲清洗器SK3300H;電子分析天平AB104-N;調速旋轉蒸發儀GG17。
  試藥:紫云英苷100662122(上海同田生物技術有限公司,含量98.0%);蘆丁10080-200306(中國藥品生物制品檢定所,含量為91.7%);百蕊草口服液自制;50%乙醇;乙腈為色譜純,水為蒸餾水,10%三氯化鋁;甲醇分析純。2.方法與結果
  2.1測定百蕊草口服液中紫云英苷的含量:
  2.1.1檢測波長的選擇取紫云英苷對照品適量,用乙醇溶解后作紫外全波長掃描,為避免干擾,選擇檢測波長為346nm。
  2.1.2色譜條件Diamonsil C。色譜柱(4.6mm×250mm,5lzm);流動相乙腈一水(23:77),用冰醋酸調pH3.85(加4滴);流速1.0mL·min-1;柱溫為常溫;檢測波長346nm。
  2.1.3對照品溶液的制備。精密稱取干燥至恒重的紫云英苷對照品8.9mg,置25mL量瓶中,加乙醇溶解至刻度,搖勻,制成0.356mg·mL-1的對照品溶液。
  2.1.4供試品溶液的制備。取一瓶百蕊草口服液用旋蒸機蒸干,加少量50%乙醇溶解,超聲20min,抽慮,置25mL容量瓶中,加50%乙醇定容至刻度,搖勻,經0.45微孔濾膜濾過,即得,取同一批次的其中三瓶口服液,取三批。
  2.1.5線性范圍考察。分別精密量取上述紫云英苷對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、6.0mL,用乙醇稀釋制成0.01424,0.02848,0.04272,0.05696,0.08544mg·mL-1的溶液,各進樣20μL,以色譜峰面積(y)對紫云英苷進樣量(X)進行回歸統計,回歸方程為Y=144873X-5814.1,R2=0.9999,表明紫云英苷在0.356-2.136mg線性關系良好,(見下圖)。
  標準品溶液1標準品溶液2標準品溶液3標準品溶液4標準品溶液5峰面積141066.984279660.125430262.688575019.125575019.1252.1.6精密度試驗。精密吸取對照品溶液(0.04272mg·mL-1)20μL,連續進樣5次,紫云英苷峰面積為430262.625、431782.899、430855.625、429998.937、430595.615,紫云英苷的含量分別為1.093、1.097、1.095、1.093、1.094mg,RSD=0.16%,表明精密度良好。
  2.1.7穩定性試驗。取上述樣品溶液,分別在0,2,4,8,10h進樣20μL,紫云英苷峰面積分別為606335.729、605791.615、606406.145、606903.632、605999.085,含量分別為1.535、1.534、1.535、1.536、1.534mg,RSD=0.07%,表明樣品溶液在16h內基本穩定。
  2.1.8重復性試驗。取同一批次(批號20111112)的三瓶百蕊草口服液,按供試品溶液制備方法制備5份供試品溶液,依法測定紫云英苷的含量,峰面積分別為585920.699、590079.825、590313.015、591098.188、592008.188,含量分別為1.484、1.494、1.495、1.497、1.499mg,RSD=0.40%,表明該方法的重復性好。
  2.1.9加樣回收率試驗。取已知含量的百蕊草口服液樣品6份,計算樣品中紫云英苷量,分別加入適量的紫云英苷對照品,按樣品制備方法和測試條件進行測定,計算加樣回收率,具體數據,(見表1)。
  表1百蕊草中紫云英苷的加樣回收率
  編號樣品中含
  量/mg添加量
  /mg測得量
  /mg回收率
  /%平均值
  /%RSD/%11.481.122.5898.221.481.482.98101.3 31.482.203.6699.1 41.601.122.7098.2 51.601.483.0799.3 61.602.203.82100.9 99.51.3%2.1.10樣品含量測定。依上述方法測定3批(20111101、20111112、20111125)百蕊草口服液中紫云英苷的含量,具體數據,(見表2)。
  表2百蕊草口服液中紫云英苷的含量
  批號樣品峰面積含量/mg平均含量/mg批次一樣品1585051.0631.482 樣品2594489.7501.505 樣品3614701.0001.555 1.514批次二樣品1606535.9381.535 樣品2586553.5631.485 樣品3610385.7501.545 1.522批次三樣品1658592.1881.666 樣品2634338.1251.505 樣品3648407.0001.640 1.6372.2總黃酮的含量測定:

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